TurboID
▲ TurboID鄰近標(biāo)記技術(shù)原理圖
TurboID鄰近標(biāo)記技術(shù)原理簡介 TurboID是一種新的生物素連接酶，它可以將生物素轉(zhuǎn)化為一種共價(jià)標(biāo)記近端蛋白質(zhì)的反應(yīng)性中間體，進(jìn)而將鄰近的蛋白質(zhì)標(biāo)記上生物素。與BioID使用的生物素連接酶相比，TurboID的催化活性得到大大提升(標(biāo)記時(shí)間從18 hrs縮短至10 min），從而大大的提高了標(biāo)記效率。
TurboID鄰近標(biāo)記(Proximity labeling, PL)的原理是將TurboID生物素連接酶與誘餌蛋白融合，當(dāng)誘餌蛋白與靶標(biāo)蛋白發(fā)生互作時(shí)，TurboID生物素連接酶通過催化的共價(jià)修飾將鄰近的蛋白標(biāo)記上生物素，最后通過親和素磁珠富集生物素標(biāo)記的蛋白進(jìn)行質(zhì)譜鑒定，從而獲得靶標(biāo)蛋白信息。蛋白-蛋白相互作用(protein-protein interactions, PPIs)是細(xì)胞生命活動(dòng)的基礎(chǔ)。傳統(tǒng)的體內(nèi)蛋白質(zhì)相互作用捕獲技術(shù)如親和純化-質(zhì)譜技術(shù)(AP-MS)，不能有效地捕獲瞬時(shí)的或較弱的蛋白相互作用，也不適用于低豐度的蛋白或疏水性較強(qiáng)的膜蛋白，且無法分辨蛋白相互作用發(fā)生的細(xì)胞區(qū)室化信息，存在較多的限制。然而，許多重要的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白如受體激酶以及細(xì)胞譜系發(fā)生的驅(qū)動(dòng)因子往往具有上述特征，這很大地限制了我們對(duì)于細(xì)胞活動(dòng)精細(xì)調(diào)控過程的認(rèn)識(shí)。
TurboID鄰近標(biāo)記技術(shù)就可以克服以上的一些難題，在研究低豐度蛋白的互作蛋白組以及稀有、瞬時(shí)細(xì)胞類型的細(xì)胞、亞細(xì)胞蛋白組方面相比傳統(tǒng)AP-MS都有明顯的優(yōu)勢(shì)。
傳統(tǒng)IP-MS和酵母雙雜交技術(shù)的弊端：
①酵母屬于低等的真核生物，相比高等生物而言，其互作關(guān)系與真實(shí)的體內(nèi)互作關(guān)系相差較大；
②不能有效地捕獲瞬時(shí)的或較弱的蛋白相互作用；
③不適用于低豐度的蛋白或疏水性較強(qiáng)的膜蛋白；
④酵母體系依賴高質(zhì)量的cDNA文庫，而且假陽性較高；
TurboID鄰近標(biāo)記技術(shù)技術(shù)優(yōu)勢(shì) ①可以捕獲瞬時(shí)的或較弱的蛋白相互作用；
②適用于低豐度的蛋白或疏水性較強(qiáng)的膜蛋白的互作；
③在目標(biāo)生物體內(nèi)獲得的互作情況可信度高，假陽性低；
④可以在佳的生理狀態(tài)下獲得的靶標(biāo)蛋白的信息；
⑤即使瞬時(shí)互作的蛋白發(fā)生了轉(zhuǎn)移，但由于靶標(biāo)蛋白仍保留了生物素化的特征，也能通過TurboID鄰近標(biāo)記技術(shù)識(shí)別檢測(cè)，不被細(xì)胞區(qū)室化所影響。
TurboID鄰近標(biāo)記技術(shù)服務(wù)范疇 ①研究蛋白與蛋白的相互作用；
②尋找目標(biāo)激酶或者激酶的底物，用于瞬時(shí)互作或者弱互作蛋白的篩選；
③用于低豐度的蛋白或疏水性較強(qiáng)的膜蛋白的篩選；
④揭示目的蛋白在體內(nèi)的互作景觀；
TurboID鄰近標(biāo)記技術(shù)服務(wù)周期 根據(jù)基因、細(xì)胞特性以及服務(wù)目的的不同，服務(wù)周期在4~6周。
服務(wù)流程 合同簽訂>預(yù)付款支付>提供靶細(xì)胞或者植物（我司現(xiàn)有的不需要提供）>項(xiàng)目啟動(dòng)>實(shí)驗(yàn)開展（定期匯報(bào)進(jìn)度）>實(shí)驗(yàn)結(jié)束>支付尾款，完成項(xiàng)目交付。
服務(wù)優(yōu)勢(shì) ①團(tuán)隊(duì)經(jīng)驗(yàn)豐富；
②密切跟進(jìn)實(shí)驗(yàn)進(jìn)展，積極主動(dòng)匯報(bào)進(jìn)展；
③根據(jù)客戶需求提供客戶項(xiàng)目的相關(guān)數(shù)據(jù)以及分析的結(jié)果；
④提供實(shí)驗(yàn)詳細(xì)記錄，確保實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)真實(shí)可靠。
